醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)

內(nèi)容概要

　　《醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)》是在總結(jié)多年免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)以及借鑒眾多編者多年來在國內(nèi)外所從事的科研工作的經(jīng)驗(yàn)基礎(chǔ)上，編寫而成的。全書共收錄了免疫學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)34個。表述條理清晰，簡明扼要。每一實(shí)驗(yàn)包括目的要求、原理、材料、方法、注意事項(xiàng)及思考題六個部分，并盡可能給出直觀、形象的結(jié)果與分析，使讀者能夠全面掌握實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，了解實(shí)驗(yàn)過程中的關(guān)鍵操作及需要注意的事項(xiàng)，從而收到知其然并知其所以然的學(xué)習(xí)效果。書后附有實(shí)驗(yàn)常用?劑的配方以供查閱參考。
本書是一本供高等醫(yī)學(xué)院校本科生、研究生以及其他相關(guān)人員使用和參考的實(shí)驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)教材。

書籍目錄

實(shí)驗(yàn)一外周血單個核細(xì)胞的分離
實(shí)驗(yàn)二T淋巴細(xì)胞亞群的測定
實(shí)驗(yàn)三MTT法檢測淋巴細(xì)胞增殖
實(shí)驗(yàn)四WST-8／CCK-8法檢測細(xì)胞增殖
實(shí)驗(yàn)五CFSE標(biāo)記檢測T細(xì)胞增殖
實(shí)驗(yàn)六混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)
實(shí)驗(yàn)七軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)八51Cr釋放法測定CTL?性
實(shí)驗(yàn)九細(xì)胞周期測定
實(shí)驗(yàn)十細(xì)胞遷移能力分析
實(shí)驗(yàn)十一流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞膜抗原
實(shí)驗(yàn)十二激光共聚焦掃描顯微鏡技術(shù)分析細(xì)胞膜分子共定位
實(shí)驗(yàn)十三流式細(xì)胞術(shù)檢測胞內(nèi)抗原
實(shí)驗(yàn)十四免疫組織化學(xué)染色法
實(shí)驗(yàn)十五ELISA法檢測細(xì)胞因子含量
實(shí)驗(yàn)十六酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)分析
實(shí)驗(yàn)十七細(xì)胞傳代培養(yǎng)
實(shí)驗(yàn)十八細(xì)胞凍存與復(fù)蘇
實(shí)驗(yàn)十九支原體?染的檢測與預(yù)防
實(shí)驗(yàn)三十人外周血單核細(xì)胞來源樹突狀細(xì)胞的制備
實(shí)驗(yàn)二十一小鼠腹腔細(xì)胞及巨噬細(xì)胞的制備
實(shí)驗(yàn)二十二小鼠脾細(xì)胞來源NK細(xì)胞的制備
實(shí)驗(yàn)二十三小鼠胸腺來源NKT細(xì)胞的培養(yǎng)和檢測
實(shí)驗(yàn)二十四小鼠肝臟淋巴細(xì)胞的分離
實(shí)驗(yàn)二十五腫瘤浸潤T細(xì)胞的分離
實(shí)驗(yàn)二十六小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(MEF)的制備
實(shí)驗(yàn)二十七兔抗人IgG多克隆抗體的制備
實(shí)驗(yàn)二十八B淋巴細(xì)胞雜交?的建株
實(shí)驗(yàn)二十九單克隆抗體的分離純化
實(shí)驗(yàn)三十免疫印跡實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)三十一免疫沉淀技術(shù)
實(shí)驗(yàn)三十二荷瘤動物模型的建立
實(shí)驗(yàn)三十三小鼠GVHD模型的建立
實(shí)驗(yàn)三十四膠原性關(guān)節(jié)炎模型的建立
附錄：免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)常用試劑及其配制方法

章節(jié)摘錄

版權(quán)頁：   插圖：   一、目的要求 1.掌握混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)的原理和操作步驟。 2.熟悉混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)的應(yīng)用及意義。 二、原理 混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（mixed lymphocyte reaction，MLR）又稱混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)（mixed lymphocyte culture，MLC），是指當(dāng)兩個無關(guān)個體、功能正常的淋巴細(xì)胞在體外混合培養(yǎng)時，由于HLA Ⅱ類抗原，尤其是HIA—D抗原不同，可相互刺激對方的T細(xì)胞發(fā)生增殖，此為雙向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)（two way MLC）；若將其中一方的淋巴細(xì)胞先用絲裂霉素C（mitomycin C）處理或射線照射使細(xì)胞中DNA失去復(fù)制能力，但仍能刺激另一方淋巴細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化，稱為單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)（one way MLC），兩個個體間HLA抗原差異程度越大，反應(yīng)越強(qiáng)烈，可通過細(xì)胞數(shù)量、形態(tài)檢查或3H—TdR摻入率檢測反應(yīng)細(xì)胞的增殖水平。如用經(jīng)照射的、已知D位點(diǎn)抗原的純合子分型細(xì)胞（Homozygous typing cell，HTC）作為刺激細(xì)胞，則可檢測待檢者的D位點(diǎn)抗原型別。若待檢者抗原與標(biāo)準(zhǔn)HIJA—D抗原相同，MLC不發(fā)生增殖，此為HLA D抗原陰性分型法。 混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（MLR）常用于器官移植前的組織配型，以測定受體和供體主要組織相容性抗原（HLA）相容的程度，由于MLC中淋巴細(xì)胞接受同種異型抗原的刺激而發(fā)生活化、增殖，產(chǎn)生種類眾多的細(xì)胞因子，促進(jìn)NK、LAK和CTL等殺傷細(xì)胞的分化，因此，又是免疫調(diào)節(jié)研究中常用的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?三、材料 1.待測細(xì)胞：供者和受者的淋巴細(xì)胞懸液，具體制備方法參見實(shí)驗(yàn)一。 2.細(xì)胞培養(yǎng)基：含10％FCS的RPMI 1640。 3.pH 7.2，0.01 mol／L PBS。 4.絲裂霉素C 30 μg／mL。 5.CO2培養(yǎng)箱、超凈臺。 6.96孔細(xì)胞培養(yǎng)板。 7.3H—TdR工作液：最好選用放射比活性為74～370 MBq／mmol的制品，將1 mCi／mL的溶液用無菌生理鹽水稀釋20倍，4℃保存，用時每孔加20 μL。 8.無水乙醇。 9.閃爍液。 10.49型玻璃纖維紙。 11.液體閃爍儀。 12.細(xì)胞培養(yǎng)瓶、滴管、吸管等。 四、方法 1.刺激細(xì)胞的準(zhǔn)備：本實(shí)驗(yàn)采用的刺激細(xì)胞為供者的外周血淋巴細(xì)胞，取新鮮分離的PBMC細(xì)胞，離心后重懸于新鮮完全培養(yǎng)基中，調(diào)整細(xì)胞密度為（1～2）×106個／mL，移置塑料培養(yǎng)瓶或50 mL離心管中，加入30 μg／ml，的絲裂霉素c，37℃水浴30 min。1 000 r／min離心10 min，棄上清，用0.01 mol／L PBS洗滌2次，每次1 000 r／min離心10 min，棄上清，細(xì)胞沉淀重懸于新鮮完全培養(yǎng)基中，調(diào)整細(xì)胞密度為（1～2）×106個／mL。 2.反應(yīng)細(xì)胞的準(zhǔn)備：分離純化待檢個體的PBMC（方法參見實(shí)驗(yàn)一），用含10％FCS的RPMI 1640調(diào)整細(xì)胞密度為（1～2）×106個／mL。

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