現(xiàn)代液相色譜技術(shù)導(dǎo)論

內(nèi)容概要

《現(xiàn)代液相色譜技術(shù)導(dǎo)論(第3版)(精)》編著者LloyR.Snyder等。
高效液相色譜法(HPLC)是當(dāng)今化學(xué)分析及其相關(guān)領(lǐng)域的領(lǐng)先技術(shù)，它可用于分離、分析和(或)純化幾乎所有的樣品。Snyder和Kirkland的這本《現(xiàn)代液相色譜技術(shù)導(dǎo)論》，一直以來(lái)就是關(guān)于HPLC技術(shù)的重要專著。
本書反映了當(dāng)前最新的研究成果及實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，以引導(dǎo)讀者認(rèn)識(shí)HPLC，了解它與其他現(xiàn)代分離技術(shù)的關(guān)系以及它的歷史為開端。

作者簡(jiǎn)介

作者：（美國(guó)）施耐德（Lloyd R.Snyder） （美國(guó)）Joseph J.Kirkland （美國(guó)）John W.Dolan 譯者：陳小明 唐雅妍

書籍目錄

第一章 簡(jiǎn)介
 1 1 背景信息
 1 1 1 什么是HPLC?
 1 2 HPLc能用作什么
1 2 HPLC的歷史簡(jiǎn)介
1 3 HPLC的一些替代技術(shù)
 1 3 1 氣相色譜法(GC)
 1 3 2 薄層色譜法(TLC)
 1 3 3
超臨界流體色譜法(SFC)
 1 3 4 毛細(xì)管電泳法(CE)
 1 3 5 逆流色譜法
 1 3 6 HPLC的特殊形式
1 4 HPLC 的其他信息資料
 1 4 1 書籍
 1 4 2 期刊
 1 4 3 綜述
 1 4 4 短期課程
 1 4 5 互聯(lián)網(wǎng)
第二章 基礎(chǔ)概念和色譜分離的控制
 2 1 介紹
 2 2 色譜分析的過(guò)程
 2 3 保留
 2 3 1 保留因子女和色譜柱的死時(shí)間
 2 3 2 分離條件和樣品組成的角色
 2 4 峰寬和柱塔板數(shù)
 2 4 1 N對(duì)色譜奈件的依賴性
 2 4 2 峰形
 2 5 分離度和方法建立
 2 5 1 優(yōu)化保留因子(等式2—24中的A項(xiàng))
 2 5 2 優(yōu)化選擇性d(等式2—24中的B項(xiàng))
 2 5 3 優(yōu)化色譜柱的塔板數(shù)，v(等式2 24中的C項(xiàng))
 2 5 4 方法建立
 2 6 進(jìn)樣量大小的影響
 2 6 1 體積超載：樣品體積對(duì)分離效果的影響
 2 6 2 質(zhì)量超載：樣品重量對(duì)分離效果的影響
 2 6 3 避免進(jìn)樣過(guò)多所引起的問(wèn)題
 2 7 其他相關(guān)的問(wèn)題
 2 7 1 色譜柱平衡
 2 7 2 梯度洗脫
 2 7 3 峰容量和=維分離
 2 7 4 峰跟蹤
 2 7 5 二次平衡
 2 7 6 色譜柱切換
 2 7 7 基于溶質(zhì)的結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)保留時(shí)間
第三章 設(shè)備
第四章 檢測(cè)器
第五章 色譜柱
第六章 中性樣品的反相色譜法
第七章 離子樣品：反相、離子對(duì)和里子交換色譜法
第八章 正相色譜
第九章 梯度洗脫
第十章 計(jì)算機(jī)輔助的方法開發(fā)
第十一章 定性與定量分析
第十二章 方法驗(yàn)證
第十三章 生物化學(xué)與合成聚合物的分離
第十四章 對(duì)映異構(gòu)體的分離
第十五章 制備色譜
第十六章 樣品的制備
第十七章 故障排除
附錄
附錄Ⅱ

章節(jié)摘錄

版權(quán)頁(yè)：   插圖：   最后，以整體柱（monolith）代替填充床柱（參閱本書5.2.4章節(jié)）是另外一個(gè)辦法。整體柱由一個(gè)連續(xù)的穿孔（through—pore）互聯(lián)骨架組成；流動(dòng)相和溶質(zhì)能夠借助這些穿孔流過(guò)柱子。因此，整體柱能在較低的壓力下進(jìn)行高流速的操作，而其柱效僅會(huì)輕微降低?；诰酆衔锖凸枘z的整體柱在市場(chǎng)上均有售。聚合物整體柱以聚甲基丙烯酸酯和聚苯乙烯二乙烯苯的材料制成，在市場(chǎng)上它們以色譜柱和盤的形式出售，分別用于分析和制備色譜。這些材料都包含大孔和小孔的雙模態(tài)孔結(jié)構(gòu)。 13.3.1.3支撐物的特性和穩(wěn)定性 多孔硅膠的多種性質(zhì)有助于它用作色譜柱的支撐物（參閱本書5.2.2章節(jié)）。令人遺憾的是，硅膠的其他性質(zhì)卻限制了它在生物分子分離中的應(yīng)用。用RPC分離肽類通常在酸性的條件（pH7）下進(jìn)行；有些基于硅膠的色譜柱在2.5≤pH≤7.5的范圍以外穩(wěn)定性下降（參閱本書5.3.1、5.3.2.1章節(jié)）。色譜分離有時(shí)候需要在高溫下進(jìn)行以改善峰形或者優(yōu)化選擇性，但是鍵合相硅膠在高于40qC時(shí)穩(wěn)定性會(huì)降低，特別是同時(shí)在極端的pH條件下。然而，使用合適的色譜柱和其他條件能降低流動(dòng)相pH和溫度對(duì)色譜柱穩(wěn)定性造成的不良影響。 另一個(gè)使用基于硅膠的色譜柱分離生物分子的主要潛在問(wèn)題是：由于硅膠表面和溶質(zhì)之間的強(qiáng)烈相互作用，使得生成的色譜峰很寬而且拖尾，以及由于不可逆的吸附造成樣品損失。這些問(wèn)題對(duì)于老式的“A類”色譜柱尤為突出；因此強(qiáng)烈推薦選用高純度的“8類”色譜柱（參閱本書5.2.2.2章節(jié)）。峰端的反相高效液相色譜柱（end.cappedRPC columns）（參閱本書5.3.1章節(jié)）也能明顯降低樣品與色譜柱之間的不良相互作用。 人們尋求了許多方法來(lái)提高鍵合相硅膠的性能以便用于生物聚合物的色譜分析。現(xiàn)在，基于硅膠的反相高效液相色譜柱已成為分離大部分肽類的選擇。對(duì)于其他的色譜模式（如離子交換和疏水性相互作用），由于基于硅膠的填料的局限性，現(xiàn)在主要是用基于聚合物的柱填料來(lái)分離肽類（參閱本書5.2.3章節(jié)）。聚合物，如聚苯乙烯—二乙烯苯和聚甲基丙烯酸，能制成多孔顆粒直接用于色譜分析（如高聚物型苯乙烯—二乙烯基苯（PS.DVB）用于RPC）?；蛘?，聚合物柱能通過(guò)引入特定的基團(tuán)而具有不同的功能（如離子部分用于離子交換法，參閱本書7.5.4章節(jié)），這些填料在較廣的pH范圍內(nèi)穩(wěn)定（包括pH10）；也能在高溫下使用，而基于硅膠的色譜柱在高溫下則會(huì)受到破壞。它們?cè)趬毫?7.2～34MPa下也能保持穩(wěn)定。用于制備和生產(chǎn)規(guī)模用途的聚合物材料的主要優(yōu)勢(shì)是它能使用強(qiáng)堿清洗，這樣就能清除如內(nèi)毒素之類的污染物。內(nèi)毒素（一般為用于生物藥劑生產(chǎn)的宿主細(xì)胞內(nèi)的脂多糖）會(huì)引起炎癥反應(yīng)，因此必須避免內(nèi)毒素進(jìn)入人類使用的藥物中。 13.3.1.4質(zhì)量回收率和生物活性 若以高效液相色譜（HPLC）分離的物質(zhì)還需要進(jìn)行進(jìn)一步鑒定或有其他用途時(shí)，則要求分析物必須有好的回收率。如果要保留生物活性，則生物聚合物必須保持其天然構(gòu)象。這就需要謹(jǐn)慎地選擇色譜模式和分離條件才能滿足這些要求。RPC可能會(huì)使蛋白質(zhì)變性，因此通常不能用于回收分子量大的蛋白質(zhì)。但是，經(jīng)過(guò)RPC分離所得的變性后的肽類或者小蛋白質(zhì)，暴露到離子條件合適且不含有機(jī)溶劑的緩沖液中，通常能恢復(fù)所有生物活性。選用其他洗脫條件苛刻（極端pH、高溫）的色譜模式都會(huì)損害到回收物的完整性和活性。多肽由于其活性部位吸附在柱填料上或截留在孔隙內(nèi)，使得其質(zhì)量回收率降低。用生物聚合物的替代物（如牛血清白蛋白或類似蛋白質(zhì)性質(zhì)的樣品）對(duì)柱子進(jìn)行預(yù)處理，使柱子在使用前失活，有助于把吸附造成的樣品損失降到最低。由于在孔隙內(nèi)蛋白質(zhì)發(fā)生解折疊而造成的樣品損失，可以通過(guò)使用大孔徑的支撐物或緩和失活條件使損失降到最低。

編輯推薦

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